A fase móvel é equivalente à fase líquida do sangue, e há várias coisas às quais prestar atenção durante o uso. Entre eles, existem algumas “armadilhas” às quais devemos prestar atenção.
01. Medir o pH da fase móvel após adicionar solvente orgânico
Se você medir o pH com um aditivo orgânico, o pH obtido será diferente daquele obtido antes da adição do solvente orgânico. Porém, o mais importante é ser consistente. Se você sempre mede o pH após adicionar o solvente orgânico, certifique-se de indicar suas etapas no método usado para que outros sigam o mesmo método. Este método não é 100% preciso, mas pelo menos manterá o método consistente. Isto pode ser mais importante do que obter um valor de pH preciso.
02. Nenhum buffer usado
O objetivo de um tampão é controlar o pH e evitar que ele mude. Muitos outros métodos alteram o pH da fase móvel, o que pode causar alterações no tempo de retenção, no formato do pico e na resposta do pico.
Ácido fórmico, TFA, etc. não são tampões
03. Não utilizar tampão dentro da faixa normal de pH
Cada tampão tem uma largura de faixa de 2 unidades de pH, dentro da qual fornece a melhor estabilidade de pH. Os tampões fora desta janela não proporcionarão resistência eficaz às alterações de pH. Use um buffer na faixa correta ou escolha um buffer que cubra a faixa de pH necessária.
04. Adicione tampão à solução orgânica
A mistura de uma solução tampão com uma fase orgânica provavelmente causará a precipitação do tampão. Em muitos casos, mesmo que tenha ocorrido precipitação, ainda é difícil de detectar. Lembre-se de sempre adicionar a solução orgânica à fase aquosa, o que pode reduzir bastante a chance de precipitação tampão.
05. Misture o gradiente de concentração de 0% com uma bomba
As bombas disponíveis hoje podem efetivamente misturar fases móveis e desgaseificar em linha, mas nem todos que usam seu método terão uma bomba de alta qualidade. Misture A e B em uma única solução e execute-a 100% em linha.
Por exemplo, 950 ml de mistura orgânica inicial podem ser preparados misturando com 50 ml de água. A vantagem disto é que pode reduzir a variabilidade entre HPLCs e reduzir a possibilidade de bolhas e precipitação no sistema. Vale ressaltar que a proporção da mistura da bomba é de 95:5, o que não significa que o tempo de retenção da pré-mistura na garrafa também seja de 95:5.
06. Não utilizar o ácido (base) modificado correto para trocar o tampão
Use apenas o ácido ou base que forma o sal tampão que você está usando. Por exemplo, um tampão de fosfato de sódio deve ser preparado apenas com ácido fosfórico ou hidróxido de sódio.
07. Não informar todas as informações sobre o buffer no método, como adicionar 5g defosfato de sódio para 1000ml de água.
O tipo de tampão determina a faixa de pH que pode ser tamponada. A concentração necessária determina a força do tampão. 5 gramas de fosfato de sódio anidro e 5 gramas de fosfato monossódico monohidratado têm diferentes concentrações de tampão.
08. Adição de solventes orgânicos antes da verificação
Se o método anterior usou uma solução tampão para a linha de base B, e o seu método usa uma solução orgânica para a linha de base B, esperamos que você possa assentar o tampão na tubulação e na cabeça da bomba.
09. Levante a garrafa e esvazie a última gota
Há uma boa chance de você não ter fase móvel suficiente para completar toda a execução e sua amostra soltar fumaça. Além da possibilidade de queimar o sistema de bombeamento e a coluna, a fase móvel irá evaporar completamente e a fase móvel no topo da garrafa irá mudar.
10. Use fase móvel de desgaseificação ultrassônica
O ponto mais importante é garantir que todos os sais tampão estejam dissolvidos, mas esta é a pior maneira de desgaseificar e aquecerá rapidamente a fase móvel, fazendo com que os componentes orgânicos evaporem. Para evitar problemas desnecessários mais tarde, reserve cinco minutos para filtrar a vácuo sua fase móvel.
Horário da postagem: 27 de agosto de 2024